现代发酵工程丛书 现代发酵微生物实验技术 第2版
作者：诸葛斌，诸葛健 主编
出版时间： 2011年版
丛编项：现代发酵工程丛书
内容简介
本书作者所在的发酵工程学科是我国最早授予的国家重点学科之一，参与编写者在教学与科研上都有较为丰富的实践经验和研究成果。 本书延续了《现代发酵微生物实验技术》（第一版）编写中“图文并茂，有论述，有操作，有结果”的特色。 在内容上保留了显微技术、微生物细胞特殊结构的观察、噬菌体、标记菌种获得与应用、原生质体系列育种技术和固定化细胞生物转化等实用技术，并结合本研究室近几年的研究经？，对基因工程育种技术部分实验进行了修订，增加了基因敲除、定点突变、表达蛋白提纯等实验技术，使该章节体系更完善。 新增了第八章“菌种保藏与机构”和第二章中“酵母菌子囊孢子的形成及观察”等相关实验技术。 本书适合高等院校微生物学、发酵工程、生物工程、食品工程等专业的高年级本科生及研究生阅读使用，也可供相关科研人员参考。
目录
第一章显微技术
第一节显微观察
一、相差显微镜
实验1?1相差显微镜的使用
二、荧光显微镜
实验1?2荧光显微镜的使用
三、电子显微镜
实验1?3细菌、酵母菌超薄切片的透射电镜观察
实验1?4噬菌体的透射电镜观察
实验1?5质粒DNA的透射电镜观察
实验1?6酵母细胞的扫描电镜观察
第二节显微摄影
实验1?7显微摄影、菌落摄影和凝胶摄影
第三节放射自显影
实验1?8硝酸纤维素滤纸上标记DNA的放射自显影
第四节显微操作技术用于单细胞分离
实验1?9显微操纵器用于单细胞分离
实验1?10显微操纵器用于酵母子囊的解剖及子囊孢子单孢化
实验1?11玻璃微型工具的制作
第五节流式细胞仪测定细胞核内DNA的含量
实验1?12流式细胞仪计数法
第二章微生物细胞特殊结构的观察
第一节染色技术
一、染色的基本原理
二、染料
三、染色
实验2?1真菌的荧光染色与观察
第二节细胞主要结构成分的分离与观察
实验2?2革兰阳性细菌细胞壁的制备
实验2?3酵母细胞壁甘露聚糖的制备
实验2?4细胞壁的形态观察
实验2?5革兰阴性菌细胞外膜蛋白的分离
实验2?6细菌荚膜的观察
实验2?7细菌鞭毛的观察
实验2?8微生物细胞核的观察
实验2?9细菌染色体DNA的分离与观察
实验2?10异染颗粒的观察
实验2?11酵母细胞内脂肪颗粒和肝糖颗粒的观察
实验2?12酵母液泡及线粒体的提取
第三节芽孢、子囊孢子和假菌丝的观察
一、芽孢
实验2?13细菌芽孢形成及发芽的观察
实验2?14伴孢晶体的观察
二、酵母子囊孢子
实验2?15酵母子囊孢子的形成及观察
实验2?16酿酒酵母单倍体细胞的制备与鉴定
三、流式细胞术
实验2?17酿酒酵母染色体倍性鉴定
四、酵母假菌丝
实验2?18酵母假菌丝的观察
第三章噬菌体
实验3?1噬菌体的分离与纯化
实验3?2高效价噬菌体原液的制备
实验3?3溶源菌的鉴定
实验3?4抗噬菌体产α?淀粉酶菌株的选育
第四章标记菌种的获得与应用
第一节富集培养技术在获得标记菌种中的应用
一、营养缺陷型富集法在原核细胞中的应用
实验4?1芽孢杆菌营养缺陷型的筛选
二、营养缺陷型富集法在真核细胞中的应用
实验4?2酵母营养缺陷型的筛选
实验4?3青霉菌营养缺陷型菌株的筛选
三、浓度梯度法富集抗性突变株
四、富集法在研究次级代谢的重组DNA技术中的应用
第二节营养缺陷型标记菌种的获得
一、诱变方法
二、淘汰野生型
三、检出缺陷型
四、营养缺陷型生长谱的确定
实验4?4芽孢杆菌营养缺陷型生长谱的确定
第三节呼吸缺陷型标记菌种的获得
实验4?5酵母呼吸缺陷型的筛选
第四节抗反馈调节抗性突变株的获得与应用
实验4?6氨基酸抗反馈调节突变株的选育
第五章原生质体系列育种技术
第一节工业菌种育种的策略
第二节原生质体融合育种
一、原生质体融合育种的特点
二、原生质体融合育种步骤与要点
三、原生质体再生率和融合率的计算
实验5?1芽孢杆菌的原生质体融合
实验5?2链霉菌原生质体融合
实验5?3小单胞菌的原生质体融合
实验5?4酿酒酵母的原生质体融合
实验5?5丝状真菌的原生质体融合
第三节原生质体转化育种
实验5?6芽孢杆菌原生质体转化
实验5?7质粒DNA转化链霉菌原生质体
实验5?8酿酒酵母的原生质体转化法
实验5?9真菌原生质体转化
第四节原生质体诱变育种
实验5?10芽孢杆菌种间融合子F?26?2原生质体诱变育种
实验5?11紫外线诱变原生质体选育L?谷氨酸高产菌
第五节原生质体技术中的一些特殊技术
一、紫外线照射原生质体增加融合率
二、供体原生质体的热灭活
三、原生质体电融合技术
实验5?12电诱导酵母原生质体融合
四、遗传转移
实验5?13原生质体融合法转移酵母线粒体及杀伤质粒
第六章基因工程育种技术
第一节基因工程的基本过程和原理
一、载体
二、DNA重组用酶
第二节大肠杆菌基因工程
一、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
实验6?1用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌
实验6?2用氯化钙制备感受态大肠杆菌
实验6?3用PEG制备和转化大肠杆菌感受态细胞
实验6?4大肠杆菌的电击转化
二、大肠杆菌中质粒的提取与纯化
实验6?5质粒的大量提取与纯化
实验6?6质粒的小量提取
实验6?7用硅胶膜分离法小量提取质粒
三、外源基因在大肠杆菌中的高表达
实验6?8载体和基因的酶切
实验6?9基因与载体的连接
第三节非大肠杆菌微生物基因工程
一、芽孢杆菌基因工程
实验6?10枯草杆菌感受态细胞的制备和转化
实验6?11枯草杆菌染色体DNA的提取
实验6?12枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）碱性果胶酶基因的PCR扩增
实验6?13从电泳凝胶中分离枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）碱性果胶酶基因
实验6?14枯草杆菌转化子质粒的提取和检测
实验6?15地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化
二、酵母基因工程
实验6?16酵母染色体DNA的提取
实验6?17酿酒酵母的乙酸锂完整细胞转化法
实验6?18单链载体DNA的制备
实验6?19酵母菌质粒DNA的提取
实验6?20碱性果胶酶基因重组巴斯德毕赤酵母的构建
实验6?21羟酸还原异构酶基因多拷贝重组啤酒酵母的构建
第四节其他基因工程育种常用技术
实验6?22酿酒酵母W303甘油酯酶GPP2基因敲除技术
实验6?23粗糙脉孢菌漆酶基因的定点突变技术
第五节蛋白质纯化技术
实验6?24利用His标签进行Ni柱纯化甘油脱氢酶的分离技术
实验6?25离子交换色谱技术分离纯化蛋白质
第七章微生物细胞固定化方法
第一节载体结合法
一、表面吸附法
二、共价结合法
实验7?1Amycolatopsis sp?ST2710的载体固定化
第二节交联法
第三节包埋法
一、藻酸钙凝胶包埋法
实验7?2酿酒酵母的藻酸钙固定化
实验7?3固定化枯草杆菌连续生产耐热α?淀粉酶
二、κ?角叉胶包埋法
实验7?4κ?角叉胶一步包埋法
实验7?5κ?角叉胶二步包埋法
实验7?6固定化酵母连续生产酒精
实验7?7固定化细胞的回收与活细胞计数
三、聚丙烯酰胺凝胶包埋法
实验7?8大肠杆菌的聚丙烯酰胺凝胶固定化
四、光交联树脂前聚体包埋法
实验7?9光交联树脂固定化原生质体
第八章菌种保藏方法与机构
第一节菌种的退化与防治措施
一、菌种退化的现象及原因
二、防止退化措施
第二节常用菌种保藏
一、菌种保藏的原理
二、常用的菌种保藏方法
实验8?1斜面保藏法
实验8?2液体石蜡保藏法
实验8?3载体保藏法
实验8?4甘油管低温保藏法
实验8?5液氮冷冻保藏法
实验8?6真空冷冻干燥保藏法
第三节基因工程菌的保藏
第四节著名菌种保藏及专利菌种保藏机构
一、中国微生物菌种保藏管理委员会组织系统
二、国际著名菌种保藏机构
三、国际确认的专利菌种保藏机构（IDA）
参考文献