《细胞生物学实验》PPT课件 薛秀花 北京师范大学

 
课件内容： 
动物细胞培养的无菌准备及主要仪器设备的使用 
本实验主要介绍动物细胞培养实验中必备的无菌操作技术，让学生建立无菌概念，掌握消毒和灭菌的方法、无菌操作技能以及主要仪器设备的操作和使用规范。重难点：掌握细胞培养无菌室的清洁与消毒、掌握细胞培养用品的包装与灭菌、掌握细胞培养用液的制备方法、主要仪器设备的规范操作。 
1.1动物细胞培养的无菌准备（实验理论） 
1.2动物细胞培养概述（实验理论） 
1.3 细胞培养间清洁与消毒（实验操作） 
1.4棉球和灯芯制作（实验操作） 
1.5细胞培养用品清洗与灭菌（实验操作） 
1.6物品包装及灭菌（实验操作） 
1.7针头滤器过滤灭菌（实验操作） 
1.8细胞培养基概述（实验理论） 
1.9细胞培养用液的制备（实验理论） 
1.10 细胞培养基配制和过滤（实验操作） 
1.11主要仪器设备的虚拟操作 
高压灭菌锅、超净工作台、移液器、天平和离心机等的主要仪器设备的虚拟操作训练 
细胞原代培养 
本实验主要介绍细胞原代培养方法，包括鼠胚和鸡胚原代细胞培养技术，让学生掌握动物细胞体外分离的技术，理解细胞原代培养的基本原理及其实验设计思路。同时针对哺乳动物细胞模型和细胞培养技术的应用做专题讲座。重难点：细胞原代培养技术应用、小鼠胚胎细胞原代培养和鸡胚细胞原代培养的关键操作。 
2.1细胞原代培养（实验理论） 
2.2小鼠胚胎细胞原代培养–实验准备和胚胎分离（实验操作） 
2.3小鼠胚胎细胞原代培养–组织块的分离与剪碎（实验操作） 
2.4小鼠胚胎细胞原代培养–组织块的培养与观察（实验操作） 
2.5鸡胚细胞原代培养–实验准备 
2.6鸡胚细胞原代培养–鸡胚分离 
2.7鸡胚细胞原代培养–组织块的分离与剪碎 
2.8鸡胚细胞原代培养–组织块的培养与观察 
2.9专题讲座哺乳动物细胞模型简介（实验理论） 
2.10专题讲座细胞培养技术的应用（实验理论） 
细胞传代 
本实验主要介绍动物细胞传代概念及操作方法。让学生掌握细胞传代操作方法，理解细胞传代的目的和意义。重难点：细胞传代的方法及操作技巧。 
3.1 细胞传代（实验理论） 
3.2细胞传代–DMEM完全培养基配制（实验操作） 
3.3细胞传代–细胞消化（实验操作） 
3.4细胞传代–分瓶培养（实验操作） 
细胞冻存 
本实验主要介绍动物细胞冻存原理及操作方法。让学生掌握细胞冻存操作方法，理解细胞冻存的原理、目的和意义。重难点：细胞冻存的原理及操作技巧。 
4.1细胞冻存（实验理论） 
4.2细胞冻存—冻存液配制（实验操作） 
4.3细胞冻存–细胞消化（实验操作） 
4.4细胞冻存—冻存细胞（实验操作） 
细胞复苏与计数 
本实验主要介绍动物细胞复苏和细胞计数的操作方法，死活细胞和常见细胞污染的鉴别。让学生掌握动物细胞复苏和细胞计数的操作技巧，理解细胞复苏的原理。重难点：细胞复苏的方法、细胞计数的操作技巧、细胞污染的鉴别。 
5.1细胞复苏与计数（实验理论） 
5.2细胞复苏与计数-完全培养基配制（实验操作） 
5.3细胞复苏与计数-快速融化冻存细胞（实验操作） 
5.4细胞复苏与计数-细胞计数（实验操作） 
5.5细胞复苏与计数-复苏细胞培养（实验操作） 
5.6 常见细胞污染的鉴别 
动物细胞盖片单层培养技术 
本实验主要介绍动物细胞盖片单层培养技术（细胞爬片）原理及方法。让学生掌握细胞爬片技术原理及操作方法。重难点：细胞爬片操作技巧 
6.1动物细胞盖片单层培养（实验理论） 
6.2 细胞爬片（实验操作） 
细胞骨架和细胞核荧光观察 
本实验主要介绍微丝骨架与细胞核染色原理及方法、微丝骨架染色实验相关溶液的制备。让学生掌握细胞微丝骨架染色技术原理及操作方法。重难点：微丝染色实验相关溶液配制操作技巧、微丝骨架染色技术的原理及操作技巧 
7.1 细胞骨架和细胞核荧光观察（实验理论） 
7.2 细胞骨架和细胞核荧光观察实验相关溶液配置 
实验操作视频1微丝骨架染料的溶解（实验操作） 
实验操作视频2 PEM缓冲液配制（实验操作） 
实验操作视频3 4%多聚甲醛溶液配制（实验操作） 
实验操作视频4 0.5% triton X-100溶液配置（实验操作） 
7.3 细胞骨架和细胞核荧光观察-细胞固定和通透（实验操作） 
7.4 细胞骨架和细胞核荧光观察-细胞微丝和细胞核染色（实验操作） 
7.5细胞骨架和细胞核荧光观察- 荧光显微镜观察细胞骨架及细胞核（实验操作） 
动物细胞的转染与GFP的RNA干扰技术  
本实验主要介绍动物细胞转染理论以及RNAi干扰技术的应用，运用细胞转染方法和RNAi技术进行实验方案设计理念及操作方法。让学生掌握动物细胞转染方法，RNAi技术的原理及操作方法。重难点：动物细胞转染理论、RNAi干扰原理、动物细胞转染以及RNAi干扰技术操作方法。 
8.1动物细胞的转染与GFP的RNA干扰技术（实验理论） 
8.2细胞转染与RNA干扰相关试剂的准备（实验操作） 
8.3 待转染质粒与脂质体混合（实验操作） 
8.4转染细胞培养与观察（实验操作） 
MTT法测定动物细胞生长曲线 
本实验主要介绍动物细胞生长曲线测定原理以及MTT法的原理及应用。让学生掌握孔板铺种细胞方法、MTT法测定细胞生长曲线的方法及操作技巧。 
9.1 MTT法测定细胞生长曲线（实验理论） 
9.2 96孔板铺种细胞（实验操作） 
9.3 细胞生长曲线测定（实验操作） 
烟草BY-2细胞培养方法及应用 
本实验主要介绍植物细胞培养技术、烟草BY-2细胞愈伤组织培养及悬浮培养方法。让学生掌握植物细胞培养技术及烟草BY-2细胞培养操作技巧。重难点：BY-2细胞培养基制备、烟草BY-2细胞的应用以及烟草BY-2细胞培养操作方法。 
10.1烟草BY-2细胞培养方法及应用（实验理论） 
10.2 BY-2细胞培养基的配制（实验操作） 
10.3 BY-2细胞培养常用吸头装盒及灭菌（实验操作） 
10.4 BY-2愈伤组织培养继代方法（实验操作） 
10.5 BY-2细胞悬浮细胞培养继代方法（实验操作） 
烟草BY-2细胞原生质体制备及瞬时转化 
本实验主要介绍植物转基因技术、烟草BY-2细胞原生质体分离及用电转仪设备进行瞬时转化方法。让学生掌握烟草BY-2细胞原生质体制备及瞬时转化操作技巧。重难点：植物细胞转化原理、植物原生质体分离方法、电转仪瞬时转化原生质体的操作方法。 
11.1烟草BY-2细胞原生质体制备及瞬时转化（实验理论） 
11.2电击缓冲液的配制（实验操作） 
11.3 原生质体培养基配制（实验操作） 
11.4原生质体酶解液配制（实验操作） 
11.5实验相关溶液的过滤除菌（实验操作） 
11.6 原生质体的分离（实验操作） 
11.7 电击转化（实验操作） 
11.8 荧光显微镜观察实验结果（实验操作） 
拟南芥叶肉细胞原生质体分离及瞬时转化 
本实验主要介绍拟南芥叶肉细胞原生质体分离及化学试剂进行瞬时转化的方法。让学生掌握拟南芥叶片为材料，进行原生质体制备及其瞬时转化操作技巧，同时与烟草BY-2细胞原生质体制备及电击瞬时转化实验方案进行对比，了解每个实验技术的使用范围。重难点：叶片叶肉细胞原生质体分离方法，化学试剂介导瞬时转化原生质体的操作方法。 
12.1 拟南芥叶肉细胞原生质体分离及瞬时转化（实验理论） 
12.2拟南芥叶肉细胞原生质体分离及瞬时转化（实验操作） 
细胞生物学实验技术及其应用 
本章节主要介绍细胞生物学实验中常用到的荧光显微镜技术及其应用。让学生掌握荧光显微镜的原理、滤光片选择原则、以及熟练进行实验操作。同时同学们可以根据自己的实验目的，选择合适的荧光显微镜。重难点：滤光片选择、显微镜操作方法。 
13.1 荧光显微镜技术的概述 
13.2 拟南芥杂交技术 （实验操作）